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基于金納米顆粒的細(xì)胞膜熒光探針具有如下通式:其中,R為氨基酸殘基,X為熒光基團(tuán)。本發(fā)明的基于金納米顆粒的細(xì)胞膜熒光探針是具有生物靶向性和特異性高的納米材料,能實(shí)現(xiàn)熒光探針的細(xì)胞膜靶向作用,為細(xì)胞膜新的檢測(cè)手段的發(fā)展做出貢獻(xiàn)。
下面瑞禧生物小編和大家一起來(lái)看基于金納米顆粒的細(xì)胞膜熒光探針的制備方法:制備含化合物b(即疏基丙酸修飾的金納米顆粒b)的溶液,MES調(diào)節(jié)pH值 為6 - 7,加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺 (NHS),反應(yīng)30min,再加入氨基酸-多胺衍生物a,然后于20 - 45°C反應(yīng)24 h,固液分離獲得 化合物c;將化合物c溶于三蒸水中,與FITC(異硫氰酸熒光素)或BODIPY(氟硼熒染料)的二 甲基甲酰胺(DMF)溶液混合后,于20 - 45°C反應(yīng)12 - 24 h后,離心得到氨基酸-多胺衍生物 修飾的金納米顆粒d或e。
氨基酸-多胺衍生物a的制備:以制備色氨酸-多胺衍生物為例,圓底燒瓶中先加入0.45 m〇L 1,4_二溴丁烷 和100 m〇L丙酮,攪拌下分批加入27.7 g鄰苯二甲酰亞胺鉀鹽,攪拌回流反應(yīng)12 h,冷卻,過(guò) 濾除去反應(yīng)生成的KBr,減壓蒸去丙酮和過(guò)量的1,4_二溴丁烷,剩余物用無(wú)水乙醇重結(jié)晶, 然后溶于60 mL乙腈中,加入10 mmoL色氨酸、20 mmoL K2CO3,在室溫下攪拌15 min,隨后升 溫至70 °C,反應(yīng)過(guò)夜后冷卻,溶液中有大量白色不溶物,過(guò)濾除去,減壓蒸除乙腈,得淡黃 色油狀物,通過(guò)層析柱分離提純得到黃色化合物;
把該黃色化合物用少量乙醇溶解置于圓 底燒瓶中,緩慢滴加10當(dāng)量的水合肼,室溫?cái)嚢柽^(guò)夜,有大量白色固體析出,用濾紙過(guò)濾除 去白色固體,得淡黃色濾液,減壓蒸除乙醇,得黃色油狀物,通過(guò)葡聚糖層析柱分離提純的 化合物a。制備其它氨基酸-多胺衍生物時(shí),只需要將色氨酸替換為相應(yīng)的氨基酸即可。
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