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新型定點(diǎn)修飾的聚乙二醇化重組人生長(zhǎng)激素(PEG-rhGH)修飾位點(diǎn)的研究方法,為該類新型修飾技術(shù)產(chǎn)物的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù).方法:采用MALDI-TOF質(zhì)譜分析修飾產(chǎn)物中聚乙二醇(PEG)的修飾個(gè)數(shù)及修飾肽段的質(zhì)量數(shù);采用LC-Q-TOF質(zhì)譜分析修飾位點(diǎn),分析色譜柱為UPLC色譜柱(Protein ACQUITY BEH C;Column,150 mm×2.1 mm,1.7μm,300A),以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液為流動(dòng)相,進(jìn)行梯度洗脫,柱溫為40℃.質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集條件為MS^(E)模式,一級(jí)質(zhì)譜能量4 eV,二級(jí)碎裂電壓30~55 eV.結(jié)果:修飾蛋白中PEG的平均相對(duì)分子質(zhì)量為30000,并且每個(gè)PEG-rhGH分子中僅存在1個(gè)PEG修飾;原型蛋白重組人生長(zhǎng)激素中第134位精氨酸被替換為賴氨酸,且該賴氨酸的ε-氨基與連接子HOOC-O-CH_(2)-CH_(2)-N_(3)中的羧基端共價(jià)結(jié)合,連接子另一端的疊氮基團(tuán)與活化后的PEG偶聯(lián)后生成修飾產(chǎn)物.結(jié)論:聯(lián)合運(yùn)用多種質(zhì)譜技術(shù),通過(guò)比對(duì)人生長(zhǎng)激素國(guó)家對(duì)照品,原型蛋白與修飾蛋白的酶切肽圖譜及對(duì)特定肽段的一級(jí),二級(jí)碎片的分子量分析,可以確定新型定點(diǎn)修飾的PEG-rhGH的修飾位點(diǎn).

英文名：PEG-N3修飾藥物

中文名：聚乙二醇-疊氮-藥物

規(guī)格：PEG分子量:2000;34000;5000可選

用 途：僅供科研實(shí)驗(yàn)使用

純度：95%

保存條件：-20度

保質(zhì)期限：12個(gè)月

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